北京协和医院近期发布了《新型冠状病毒核酸检测》标准操作流程。这为我们建设2019-nCov新型冠状病毒P3实验室建设提供了科学指导。
具体检测流程如下
一、核酸检测前的生物安全防护（工作人员个人三级防护的穿戴）
1、穿戴流程：
在基因扩增实验室的清洁区（更衣区）或者普通实验室的洁净区，工作人员按顺序依次穿戴好一次性帽子、医用N95口罩、一次性防护服、一次性鞋套、一次性防水靴套、防护目镜和双层乳胶手套，进入样本处理工作区域或实验室。
2、要点提示：
2.1、具备标准基因扩增布局条件的实验室，应在清洁更衣区做好个人三级防护，条件有限的实验室亦可选择在一洁净的实验室中按流程穿戴好个人三级防护。
2.2、需佩戴医用N95口罩，若无医用N95口罩，可以考虑用普通N95/KN95口罩外加一次性外科口罩的组合方式，但不要佩戴有呼吸阀的N95口罩。
2.3、佩戴N95口罩时需检查密闭性，通过双手按压、深呼吸、左右转头等动作严格检查口罩是否佩戴正确。
2.4、一次性防护服已具备新型冠状病毒核酸检测的防护需求，有条件时可以考虑加穿一次性反穿隔离衣，穿衣时需由他人协助。
2.5、穿戴整齐的工作人员，应按要求尽快进入样本处理的实验区域开展工作，严禁穿戴三级防护后再进入普通实验区域或办公区域。
二、样本的灭活处理
1、操作流程：
两名完成三级防护的工作人员，进入样本处理区或样本处理专用实验室，将接收到的样本二级包装在安全柜内打开，检查样本主容器是否为严格密闭；对密封袋表面进行消毒后，对送检样本进行56℃下30分钟的灭活，灭活后的样本管需在生物安全柜内打开最内层的容器，将拭子保存液混匀后进行分装和用于核酸提取。
2、要点提示：
2.1、涉及高致病性病原微生物的实验室活动，需由两名工作人员完成，其中一人负责主要实验操作，一人提供必要的协助。主操作者应避免反复多次进出安全柜。
2.2、灭活形式：可以采用水浴或空气加热形式完成灭活，采用空气加热时可适当延长灭活时间。有条件时可以采用小型化设备在安全柜内操作，减少样本进出安全柜的次数。灭活前的样本严禁在生物安全柜外打开和操作。
2.3、应特别检查采样管是否拧紧、有无样本溢漏等情况。
2.4、样本管每次进出安全柜均需对外表面进行消毒。
2.5、应就近配备适量的消毒处理物品，以防止实验操作过程中可能发生的意外溢洒事故，有条件时建议在安全柜内配备一次性吸水台布。
三、样本的核酸提取
1、手工核酸提取操作流程（以凯杰的52906柱提法核酸提取试剂盒为例）
1.1、裂解液配制：在基因扩增实验室的试剂配制区或单独的普通试剂配制实验室中，准备核酸提取所需的洗液1（AW1）、洗液2（AW2）和carrier RNA。按照要求，分别向洗液1和洗液2中加入分子生物学级别的130ml和160ml的无水乙醇并及时做好标记；取310μl洗脱液（AVE）溶解310μg/支的Carrier RNA。配置好后，通过传递窗进入核酸提取区或由工作人员送入核酸提取专用实验室。
1.2、样本裂解：取560μl AVL裂解液到1、5ml无菌EP管中，加入5、6μl配制好的Carrier RNA，再加入已经灭活的140μl样本（例如咽拭子、血浆等），混匀振荡15秒，室温静置10分钟，充分裂解样本中的核酸。将EP管瞬时离心后加入560μl无水乙醇，充分混匀15秒，再次瞬时离心后备用。吸取630μl裂解产物，小心加入至离心柱中，8000rpm（或6000g）离心1分钟，转移离心柱至新收集管，将剩余630μl裂解产物加到离心柱中，重复上一离心操作（若样本体积大于140μl，则在此步骤重复将630μl裂解产物过滤收集在一个离心柱上）。
1.3、核酸的洗涤：取500μl洗液1（AW1）至离心柱中，8000rpm（或6000g）离心1分钟；换新收集管后，取500μl洗液2（AW2）至离心柱中，8000rpm（或6000g）离心1分钟；换新收集管后，用14000rpm（或20000g）离心3分钟，去除洗液2（AW2）；换新收集管后，继续用离心机最大转速（20000g）离心1分钟，充分甩离残留的洗液2（AW2）。
1.4、核酸的洗脱和回收：取一1、5ml无菌EP管，将离心柱放入其中，加入洗脱液（AVE）40~60μl，室温静置1分钟后，用8000rpm离心1分钟回收核酸，以备PCR检测使用。
1.5、要点提示：
（1）、新鲜裂解液的配制应尽可能在专门的洁净区域或单独的实验室进行。
（2）、要用分子生物学级别的无水乙醇试剂进行配制。
（3）、向离心柱中加入裂解产物、洗液时操作要非常小心，尽量将洗头下探到离心柱内部后靠管壁加样，切忌出现溢洒后污染到离心柱的密封圈，这可能会导致乙醇残留，抑制后续PCR反应。
（4）、从离心机中取出离心柱时应小心操作，避免离心柱下缘被收集管中的滤过残液污染。
（5）、加入洗液2（AW2）后的第二次空管全速离心非常关键，能帮助充分甩离离心柱滤膜中残留的洗液2残液，确保洗脱核酸的纯度。
（6）、洗脱液加样时需小心操作，确保洗脱液尽可能覆盖全部离心柱滤膜，充分洗脱核酸，提高核酸提取的产量。
（7）、手工核酸提取可优选使用检测试剂盒说明书推荐的配套手工提取试剂，也可选用通用手工提取试剂。
（8）、样本处理过程中，工作人员觉得有必要时，应随时更换新的外层乳胶手套。
2、采用核酸提取仪提取核酸的操作流程
根据核酸提取仪和试剂的说明书准备好提取试剂，取200μl样本上机提取核酸，并按照要求回收提取好的核酸备用。
要点提示：
1、不同的提取仪器和试剂的提取效率可能存在差异，请一定严格按照提取试剂盒的说明书进行核酸提取操作。
2、有条件时可以考虑配备小型化的核酸提取仪在安全柜内使用，以进一步加强生物安全防护；若使用在安全柜外的核酸提取仪，则一定要做好生物安全防护及样本的防污染保护。
四、PCR体系的配制和模板加样
1、操作流程：
在基因扩增实验室的试剂配制区或单独的专用实验室，配制PCR体系。根据试剂盒说明书的要求，将试剂盒的不同组分（一般包括反应液、酶、引物等）按照各自必须的体积量进行配制混合，充分混匀并离心后，通过传递窗传递到核酸提取和加样区，或由专人从试剂配制实验室送至核酸提取和加样专用实验室。在加样专用生物安全柜内，根据检测样本例数分装体系到每个反应管中，逐一将样本核酸加入到对应的反应管中，并加盖密闭好PCR反应管；每批次检测需要做一个阳性对照和3个阴性对照。
2、要点提示：
（1）、试剂配制必须严格在试剂配制区或单独、洁净的专用实验室和安全柜内进行，以确保试剂不会有被污染的可能。
（2）、试剂配制时要根据检测样本数量进行合理配制，每批次检测均需要包括3个阴性对照和1个阳性对照的试剂，同时还需要考虑试剂分配过程中的正常损耗等消耗。
（3）、加样可以和样本处理/核酸提取在同一分区或同一间实验室进行，但如有条件最好在单独的加样区或至少使用专用安全柜进行加样。
（4）、体系分装建议每次更换新的吸头，避免反复使用带来体积误差和交叉污染。
（5）、应配置体系加样登记表，确保加样过程准确无误。
（6）、PCR密闭管盖应特别谨慎，建议更换新的手套，防止手套等接触管盖内部带入污染的风险。
五、上机检测及结果分析
1、操作流程：
在扩增区或专用扩增实验室，由专人取出配制好的PCR检测管，混匀、离心后，小心上机检测，按照试剂盒说明书设置扩增参数并分析判读结果。进行结果分析时，应认真阅读试剂盒说明书，在了解该试剂盒的灵敏度、检测方法和局限性等技术特点的基础上，结合该批次阴性质控的结果，综合判读样本的检测结果。检测结束后，为防止可能的扩增污染，扩增结束后的PCR管严禁开盖或带离扩增实验室，应尽快通过可密封塑料袋等容器盛装密闭后，放入指定专用医疗垃圾桶中做进一步处理。
2、要点提示：
（1）、因基因扩增区存在污染的风险，应设专门的扩增区域或在单独的专用实验室进行扩增，必须和核酸提取、试剂配制区域有严格的物理分割。
（2）、不同操作区域的工作服不要混穿，特别是基因扩增区的工作服，建议仅在扩增区域或扩增实验室内使用。
（3）、熟悉检测用PCR仪器的基本性能和特点，能客观分析判断检测结果。
六、检测后的消毒处理
1、操作流程：
（1）、生物安全柜内：在完成样本核酸提取后，应在安全柜内用75%消毒酒精对外层手套进行消毒处理，并将外层手套取下后弃至安全柜内的垃圾桶中。小心收纳并丢弃使用过的一次性吸水台布，用0、5%~1%的有效氯消毒剂或75%酒精擦拭安全柜台面、移液器等安全柜内全部仪器的表面。将安全柜内产生的新型冠状病毒相关医疗垃圾经3层包装后，转移至实验室的专用医疗垃圾桶中。开启紫外灯照射生物安全柜，时间应大于30分钟。
（2）、样本核酸提取工作人员实验室内：他人协助用0、5%~1%的有效氯消毒剂或75%酒精均匀喷洒内层手套、袖口、手臂及隔离衣后，将外层反穿隔离衣脱下至新型冠状病毒专用医疗垃圾桶中送高压处理。
（3）、样本处理实验室内：用0、5%~1%的有效氯消毒剂或75%酒精消毒实验室台面和地面；开紫外灯进行大于30分钟的空间消毒。
（4）、工作人员摘脱三级防护：在缓冲区戴新的外层手套，摘护目镜置于75%酒精浸泡消毒，从头开始，自上而下、由内而外缓慢翻转脱下一次性防护服，直到将一次性防水靴套全部脱下，将防护服置于新型冠状病毒专用医疗垃圾桶中送高压处理。摘口罩、帽子、内层鞋套和内层手套后同样置于新型冠状病毒专用医疗垃圾桶中送高压处理。
（5）、新型冠状病毒相关医疗垃圾：所有新型冠状病毒相关医疗垃圾均需经湿热高压灭菌后再作为普通医疗垃圾处理，且垃圾袋上应标注新型冠状病毒医疗垃圾的相关信息。高压处理前后的垃圾要严格区分，在高压灭菌专用区域对新型冠状病毒医疗垃圾进行湿热高压灭菌处理，高压参数为121℃、30分钟。高压要做物理、生物指示，以确保高压灭菌的效果。
2、要点提示：
（1）、生物安全柜内是风险最高区域，操作者的外层手套经消毒后必须脱在安全柜内。
（2）、靴套或鞋套的主要作用是对操作者的脚和腿部进行防护，要求必须防水，以确保在实验室内发生意外遗洒时可隔离污染。
（3）、核酸提取仪内部、生物安全柜内部和实验室空间均应进行紫外线消毒，但紫外线对空气的消毒效果好，对物体表面的消毒效果随距离变远而减弱，故在紫外线消毒前，仍需对各种仪器表面、台面、地面用消毒剂进行擦拭消毒。
（4）、工作人员在摘脱个人三级防护后，仍应参照实验室原有实验后操作流程进行严格认真的常规消毒处理，特别是实验后的手卫生环节。
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医学生物安全二级实验室建设、设计施工规范
深圳喜格实业SICOLAB整理（实验室布局设计、建设）
（一）引用标准
《建筑地基基础设计规范》GB50007
《建筑结构可靠度设计统一标准》GB50068
《建筑抗震设防分类标准》GB50223
《洁净室施工及验收规范》GB50591
《民用建筑供暖通风与空气调节设计规范》GB50736
《汽车、挂车及汽车列车外廓尺寸、轴荷及质量限值》GB1589
《高效空气过滤器》GB/T13554
《医院消毒卫生标准》GB15982
《实验室生物安全通用要求》GB19489
《临床实验室设计总则》GB/T20469
《移动实验室仪器设备通用技术规范基本信息》GB/T29476
《移动实验室实验舱通用技术规范》GB/T29477
《军用方舱通用试验方法》GJB2093A
《军用方舱通用规范》GJB6109
《塑料薄膜包装袋热合强度试验方法》QB/T2358
《医疗机构消毒技术规范》WS/T367
（二）主要专业术语
一、医学生物安全二级实验室、生物安全二级实验室：符合国家标准《实验室生物安全通用要求》GB19489-2008所规定的生物安全防护水平为二级实验室.
二、加强型医学BSL-2实验室指在医学BSL-2实验室中,设置缓冲间、机械通风系统、排风高效过滤等措施且有明确负压或压力梯度要求的实验室.其余为普通型医学BSL-2实验室.
三、一级屏障
操作者和被操作对象之间的隔离,也称一级隔离.
四、二级屏障
生物安全实验室和外部环境的隔离,也称二级隔离.
五、实验室防护区laboratorycontainmentarea实验室的物理分区,该区域内生物风险相对较大,需对实验室的平面设计、围护结构的密闭性、气流,以及人员进入、个体防护等进行控制的区域.
（三）技术指标
一、普通型BSL-2实验室采用自然通风时,应满足现行国家标准《民用建筑供暖通风与空气调节设计规范》GB50736的有关要求.
二、加强型医学BSL-2实验室核心工作间不应设可开启的外窗.
三、可根据操作人员穿着防护设备适当调节医学BSL-2实验室温度.
四、负压房间应在入口显著位置安装压力显示装置,并标识压力合格范围.
五、加强型医学BSL-2实验室核心工作间应对大气保持负压状态.
六、本表中的噪声不包括生物安全柜、通风柜等设备的噪声,当生物安全柜、通风柜等设备开启时,最大不应超过６８dB（A）.
七、当移动实验室在高原、沙漠和严寒等特殊环境下开展工作时,应能适应相应极端环境要求.
（四）建筑、结构、装修
一、普通型医学BSL-2实验室的建筑应符合下列规定:
1.实验室的设计应保证对生物、化学、辐射和物理等危险源的防护水平控制在经过评估的可接受程度,为关联的办公区和邻近的公共空间提供安全的工作环境,及防止危害环境；
2.实验室规模的评估与计算方法可按现行国家标准《临床实验室设计总则》GB/T20469的有关规定执行；
3.实验室应设可自动关闭的房门,除更衣室外的门体上应有可视窗.门锁及门的开启方向不应妨碍室内人员逃生；
4.实验室核心工作间入口宜设置缓冲间,缓冲间可兼做个体防护装备更换间；
5.实验室在入口处应有更衣的条件；
6.实验室防护区及辅助工作间的面积以及高度应满足实验室设备、生物安全柜等的安装、使用、维护以及清洁要求,保证工作流程顺畅并符合工效学的原则和要求,避免相互干扰、交叉污染,并不应妨碍逃生和急救.实验室应满足大型仪器设备搬运的需求,并为特殊需求设备设置局部隔离、防振、排热、排湿设施；
7.实验室应设计并明确标识紧急撤离路线,紧急出口应有明显的标识.标识应能在黑暗中清晰可辨；
8.实验室应设有防止节肢动物和啮齿动物进入措施,当设有可开启外窗时应设置防虫纱网；9.实验室应配备对物体表面消毒的技术措施,并应符合国家现行标准《医院消毒卫生标准》GB15982和《医疗机构消毒技术规范》WS/T367的有关规定.
10.实验室入口应有标识,明确说明生物防护级别、操作的致病性生物因子、实验室负责人、紧急联系方式和国际通用的生物危险符号；适用时,应同时注明其他危险；
11.应在实验室所在建筑物内配备压力蒸汽灭菌器或其他适用的消毒灭菌设备.移动式实验室内应配备便携的消毒灭菌设备,需要时,应配置压力蒸汽灭菌器或其他适当消毒灭菌设备.
二、普通型医学BSL-2实验室的装修应符合下列规定:
1.实验室墙壁、顶板和地板应光滑、易清洁、防渗漏并耐化学品和消毒剂的腐蚀.地面应防滑,不应在实验室内铺设地毯及使用织物窗帘等装饰品.对使用液氮的实验室,地面尚应耐受低温；
2.实验室台（桌）柜和座椅等应稳固和坚固,边角应圆滑.实验台面应防水,并应耐受中等程度的热、有机溶剂、酸碱、消毒剂及其他化学剂；
3.实验室的地板、墙壁和天花板表面的贯穿件、墙体交接处Ｇ阴阳角应可靠密封；
4.实验室的灯具、风管和水管等内部设施附件的设置应便于清洁；
5.移动式实验室在移动时,应有可靠机制和措施固定仪器设备、实验器材和座椅等物品.
三、普通型医学BSL-2实验室的结构应符合下列规定:
1.实验室的结构设计应符合现行国家标准《建筑结构可靠度设计统一标准》GB50068的有关规定；
2.实验室的抗震设计应符合现行国家标准《建筑抗震设防分类标准》GB50223的有关规定；
对于测序仪、荧光定量PCR仪、荧光显微镜等有特殊防震要求设备的实验室,应符合设备防震要求；
3.实验室的地基基础设计应符合现行国家标准《建筑地基基础设计规范》GB50007的有关规定.
四、移动实验室刚性结构（方舱）性能评价应符合下列规定:
1.围护结构应符合现行国家标准《军用方舱通用规范》GJB6109的有关规定,根据空间布局需要,可采用扩展舱结构,但应保证结构安全、可靠；
2.方舱舱体设计、制造应符合现行国家标准《移动实验室实验舱通用技术规范》GB/T29477的有关规定,在满足移动特性的基础上,合理布局,突出可操作性、可维护性,符合工效学原理；
3.方舱应具备可维修性,宜采用标准件、通用件,易损件应便于维修与更换；
4.方舱的外廓尺寸及质量限值应符合现行国家标准《汽车、挂车及汽车列车外廓尺寸、轴荷及质量限值》GB1589或《军用方舱通用规范》GJB6109的有关规定；
5.方舱应设置进舱和上舱顶的辅助设施,在承受18kN垂直向下静载荷时,应无塑性变形或损坏,应满足现行国家标准《军用方舱通用试验方法》GJB2093A的有关规定；
6.方舱应具备防雨密封性,在门、窗、孔口关闭,经强度为5mm/min~7mm/min,方向与侧壁成450,历时30min的淋雨试验后,舱内顶蓬与侧壁无渗漏现象,门窗、孔口处不应有漏水现象.
移动实验室柔性结构实验室性能评价应符合下列规定:
1.帐篷支撑结构应满足在负压环境下的刚度、强度及稳定性要求；
2帐篷成型工艺应保证成型后的密封性能及连接面的力学性能满足现行行业标准《塑料薄膜包装袋热合强度试验方法》QB/T2358的有关要求
五、加强型医学BSL-2实验室
1.加强型医学BSL-2实验室除应符合本节规定外,适用时尚应符合上述普通型医学BSL-2实验室的有关规定.
2.核心工作间不应设置可开启外窗.
3.加强型医学BSL-2实验室的核心工作间入口应设置缓冲间,当缓冲间的门设置互锁时,应在互锁门的附近设置紧急手动解除互锁开关.
4.加强型医学BSL-2实验室的围护结构应能承受送风机或排风机异常时导致的空气压力载荷.
5.加强型医学BSL-2实验室应在实验室内配备压力蒸汽灭菌器以及其他适用的消毒设备.
（五）空调、通风和净化
一、普通型医学BSL-2实验室的空调、通风和净化系统应符合下列规定:
1.实验室通风空调方式的设置应根据实验室所处气候区域,操作对象的危害程度、平面布置、风险评估结果等情况经技术经济比较后确定,并应采取有效措施避免污染和交叉污染.通风空调方式的设置应有利于实验室消毒灭菌、自动控制系统的设置和节能运行；
2.实验室应依据风险评估、依据所操作病原微生物样本及材料的感染性及危害性选择自然通风或机械通风.有明确负压设计要求的房间应设置机械通风系统.当采用机械通风系统时,应避免气流流向导致的污染和避免污染气流在实验室之间或与其他区域之间串通而造成交叉污染；
3.有负压要求的实验室其机械通风系统应独立于所在建筑的通风系统,以防止空气传播的感染因子、气态污染物或气味向其他工作区扩散.不同防护区应设置各自独立的通风系统；
4.实验室应在操作病原微生物及样本的实验间内配备生物安全柜.应按产品的设计要求安装和使用生物安全柜.排风在室内循环的生物安全柜,室内应具备通风换气的条件；需要管道排风的生物安全柜,应通过独立于建筑物其他公共通风系统的管道排出；
5.当涉及使用有毒、刺激性、挥发性物质时,应配备排风柜（罩）；
6.实验室机械通风系统的设计应保障生物安全柜、排风柜（罩）等的正常使用条件；
7.移动实验室仪器设备应适应不同海拔低气压环境条件,按现行国家标准《移动实验室仪器设备通用技术规范基本信息》GB/T29476要求至少应保证在气压值不低于84KPa环境中正常工作.
二、当医学BSL-2实验室设有机械通风系统时,送风系统新风口应符合下列规定:
1.新风口应采取有效的防雨措施；
2.新风口处应安装防鼠、防昆虫、防挡绒毛等的保护网,且易于拆装；
3.新风口应高于室外地面２５m以上,且附近不应设置排风口和其它污染源.
医学BSL-2实验室应根据所使用生物安全柜的类型以及实验操作风险合理选择生物安全柜排风连接方式,当使用IIA２型生物安全柜时,宜通过排风罩连接至医学BSL-2实验室排风系统.
使用密闭排风管道时,安全柜排风管道应独立于建筑物其他公共通风系统的管道.
三、普通型医学BSL-2实验室内气流组织应符合下列规定:
1.应避免对生物安全柜等设备的窗口气流流向产生干扰.在生物安全柜操作面或其他有气溶胶产生地点应远离门窗、实验室人员活动区域和其他可能干扰气流组织或实验活动位置,其上方附近不应设送风口；
2.采用机械通风系统的实验室防护区内送风口和排风口的布置应符合定向气流的原则,减少房间内的涡流和气流死角.排风口应设在室内被污染风险最高的区域,其前方不应有障碍.采用上送下排方式时,排风口下边沿高地面不宜低于01m,且不宜高于01５m.排风口排风速度不宜大于1m/s.
四、普通型医学BSL-2实验室通风空调系统的部件与材料应符合下列规定:
1.实验室通风空调系统所使用送、排风过滤器均不应使用木制框架；
2.实验室通风空调系统中需要消毒的通风管道应采用耐腐蚀、耐老化、不吸水、易消毒灭菌的材料制作；
3.排风机外侧的排风管上室外排风口处应安装保护网和防雨罩.
五、普通型医学BSL-2实验室空调设备的选用应符合下列规定:
1.不应采用淋水式空气处理机组.当采用表面冷却器时,通过盘管所在截面的气流速度不宜大于20m/s；
2.各级空气过滤器前后应安装压差计,测量接管应通畅,安装严密；
3.宜选用干蒸汽加湿器；
4.加湿设备与其后的过滤段之间应有足够的距离；
5.在空调机组内保持1000Pa的静压时,箱体漏风率不应大于2％；
6.消声器或消声部件的材料应能耐腐蚀、不产尘和不易附着灰尘；
７送、排风系统中的中效、高效过滤器不应重复使用.
六、加强型医学BSL-2实验室
1.加强型医学BSL-2实验室除应符合本节规定外,适用时尚应符合本标准上述普通型医学BSL-2实验室的有关规定.
2.加强型医学BSL-2实验室排风应经高效空气过滤器过滤后排出.
（六）给水排水和气体供应
一、普通型医学BSL-2实验室
普通型医学BSL-2实验室的给水排水和气体供应系统应符合下列规定:
1.普通型医学BSL-2实验室应设洗手池,水嘴开关宜为非手动式并设置在靠近出口处；2.普通型医学BSL-2实验室工作区应配备洗眼装置,风险较大时应设紧急喷淋装置；
3.给水排水干管、气体管道的干管,应敷设在技术夹层内.实验室防护区应少敷设管道,与本区域无关管道不应穿越；
4.进出实验室防护区的给水排水和气体管道系统不应渗漏,应耐压、耐温、耐腐蚀；
5.移动实验室仪器设备应适应不同海拔低气压环境条件,按现行国家标准《移动实验室仪器设备通用技术规范基本信息》GB/T29476要求至少应保证在气压值不低于84kPa环境中正常工作.普通型医学BSL-2实验室的给水系统室内给水管材宜采用不锈钢管、铜管或无毒塑料管等,管道应可靠连接.
二、普通型医学BSL-2实验室的排水系统应符合下列规定:
1.实验室防护区内水槽存水弯、地漏应保持畅通、装满水或适当消毒剂.存水弯的水封高度不得小于50mm,且不得大于100mm；
实验室防护区排水系统的通气管口应单独设置,不应接入空调通风系统排风管道.
三、普通型医学BSL-2实验室的气体供应系统应符合下列规定：
1.实验室专用气体宜由高压气瓶供给,气瓶应有内容物的明确标识以及颜色等区分措施,气瓶宜设置于辅助工作区,应有固定措施,通过管道输送到各个用气点,并应对供气系统进行监测；
2.实验室用气点应根据工艺要求设置过滤器；
3.若使用高压气体和可燃气体,应有安全措施,应符合国家、地方的相关规定和要求.
四、加强型医学BSL-2实验室
1.加强型医学BSL-2实验室除应符合本节规定外,适用时尚应符合本标准上述普通型医学BSL-2实验室的有关规定.
2.加强型医学BSL-2实验室洗手池水嘴应为非手动式.3.加强型医学BSL-2实验室防护区的给水管道应采取设置倒流防止器或其他有效的防止回流污染的装置,并且这些装置应设置在辅助工作区.
4.加强型医学BSL-2实验室的供气管穿越防护区处应安装防回流装置.
（七）、电气
一、普通型医学BSL-2实验室电气应符合下列规定:
1.实验室应保证用电的可靠性,设计用电负荷不宜低于二级；
2.实验室需要持续供电维持功能的温湿度监控设备、培养箱、生物安全柜、冰箱等应设置备用电源.长时间运行且无断电记忆的检测设备应设置不间断电源；
3.实验室应设专用配电箱,专用配电箱应设置于辅助工作区内；
4.实验室内应设置足够数量的固定电源插座,避免多台设备使用共同的电源插座.重要设备应单独回路配电,且应设置漏电保护装置；5.移动实验室仪器设备应适应不同海拔低气压环境条件,按现行国家标准《移动实验室仪器设备通用技术规范基本信息》GB/T29476要求至少应保证在气压值不低于84kPa环境中正常工作.
二、普通型医学BSL-2实验室照明应符合下列规定:
1.实验室内的采光或人工照明应保证室内人员安全工作,避免不必要的强光、反光和闪光；
2.实验室内应设应急照明装置,同时考虑合适的安装位置,以保证人员安全离开实验室.
三、普通型医学BSL-2实验室自动控制应符合下列规定:
1.当空调机组设置电加热装置时应设置送风机有风检测装置,并在电加热段设置监测温度的传感器,有风信号及温度信号应与电加热连锁；
2.空调通风系统未运行时,防护区送风、排风管上的风阀应处于常闭状态；3.实验室有对温湿度敏感的设备时,应设置监测温湿度的传感器,温湿度信号应与空调控制系统连锁.四、普通型医学BSL-2实验室安全防范应符合下列规定:1.实验室的关键部位应设置监视器,需要时,可实时监视并录制实验室活动情况和实验室周围情况.监视设备应有足够的分辨率并保存影像数据；2.实验室入口的门应有进入控制措施,进入实验室应仅限于获得授权的人员.正在检验高风险样本时应有进入限制.存放高风险样本、培养物、化学试剂或供应品还需采取可锁闭的门、可锁闭的冷冻箱、特殊人员的进入限制等其他的安全措施.应评估生物材料、样本、药品、化学品和机密资料被偷盗和被不正当使用的危险,并采取相应措施防范其发生.
五、普通型医学BSL-2实验室通信与信息化应符合下列规定:
1.实验室应配备适用的通信与信息化设备,保证实验数据、影像等资料安全传输；
2.实验室应配备适用的通讯设备,当安装对讲系统时,宜采用向内通话受控、向外通话非受控的选择性通话方式.
六、移动实验室方舱
应配备漏电保护装置及接地装置,当环境温度15℃~35℃,相对湿度45％~75％时,电气回路间及对地的冷态绝缘电阻不应小于2MΩ.七、加强型医学BSL-2实验室
1.加强型医学BSL-2实验室除应符合本节规定外,适用时尚应符合本标准普通型医学BSL-2实验室的有关规定.2.加强型医学BSL-2实验室空调净化自动控制系统应能保证实验室压力和压力梯度稳定,并可对异常情况报警.3.加强型医学BSL-2实验室送排风系统应设置连锁,排风机先于送风机启动,后于送风机关闭.
（八）消防1.医学BSL-2实验室耐火等级应与所在建筑相同且不宜低于二级.2.医学BSL-2实验室的所有疏散出口都应有消防疏散指示标志和消防应急照明措施.3.医学BSL-2实验室应设置火灾自动报警装置和合适的灭火器材.
（九）施工
一、普通型医学BSL-2实验室
普通型医学BSL-2实验室的施工应符合下列规定:1.以生物安全防护为核心,编制施工方案；2.各道施工程序均应进行记录,验收合格后方可进行下道工序施工；3.施工安装完成后,应进行单机试运转和系统的联合试运转及调试,做好调试记录,并应编写调试报告.
二、普通型医学BSL-2实验室的建筑装修应符合下列规定:
1.医学BSL-2实验室中各种台、架、设备应采取防倾倒措施,相互之间应保持安全距离.当靠地靠墙放置时,应用密封胶将靠地靠墙的边缘密封；2.移动式实验室固定设备、台柜、壁柜应坚固并与舱体可靠连接,连接处应圆滑,便于清洁.
三、普通型医学BSL-2实验室的空调、通风和净化系统应符合下列规定:
1.空调机组安装时应调平,并作减振处理.
各检查门应平整,密封条应严密.表冷段的冷凝水排水管应设置水封和阀门；
2.送、排风管道的材料应符合设计要求,加工前应进行清洁处理,去掉表面油污和灰尘；
3.风管加工完毕后,应擦拭干净,并应采用薄膜把两端密封住,安装前不得去掉或损坏；
4.技术夹层里的任何管道和设备穿过防护区时,贯穿部位应可靠密封.灯具箱与吊顶之间的孔洞应密封不漏；
5.送、排风管道咬口连接的咬口缝均应用胶密封；
6.各类调节装置应严密,调节灵活,操作方便.
四、普通型医学BSL-2实验室的实验室设备安装应符合下列规定:
1.生物安全柜背面、侧面与墙的距离不宜小于３00mm,顶部与吊顶的距离不应小于３00mm；
2.传递窗、双扉压力蒸汽灭菌器等设施与实验室围护结构连接时,应保证箱体的严密性；
3.传递窗、双扉压力蒸汽灭菌器等设备与轻体墙连接时,应在连接部位采取加固措施；
4.具有消毒功能的传递窗和药液传递箱的内表面不宜使用有机材料；
5.医学BSL-2实验室内配备的试验台面应光滑、不透水、耐腐蚀、耐热和易于清洗；
6.医学BSL-2实验室的试验台、架、设备的边角应以圆弧过渡,不应有突出的尖角、锐边、沟槽.
五、加强型医学BSL-2实验室
加强型医学BSL-2实验室除应符合本节规定外,适用时尚应符合本标准普通型医学BSL-2实验室的有关规定.
加强型BSL-2实验室的排风高效过滤器应符合现行国家标准《高效空气过滤器》GB/T1３５５４的有关规定.
直到现场安装时方可打开包装.排风高效过滤器的室内侧应有保护高效过滤器的措施.
（十）检测和验收
一、普通型医学BSL-2实验室工程验收的内容应包括建设与设计文件、施工文件和必要的检测报告等.
普通型医学BSL-2实验室防护区宜采用目测方法对围护结构接缝、设施设备及管道穿越围护结构处、电气面板开关等的密封情况进行检查,应无可见泄漏.
工程验收应由具有资质的质检部门进行并出具工程验收报告,并应根据下列规定作出验收结论:
1.对于符合本标准要求的,判定为合格；
2.对于存在问题,但经过整改后能符合本标准要求的,判定为限期整改；3.对于不符合本标准要求,又不具备整改条件的,判定为不合格.
二、加强型医学BSL-2实验室
1.加强型医学BSL-2实验室除应符合本节规定外,适用时尚应符合本标准普通型医学BSL-2实验室的有关规定.2.加强型医学BSL-2实验室建设完成后应对室内环境控制参数进行检测,检测合格后方可投入使用.
3.检测方法和要求宜按现行国家标准《洁净室施工及验收规范》GB50591的有关规定执行.
4.装备有生物安全柜、排风柜等对房间送、排风量平衡以及压力梯度有影响设备的加强型医学BSL-2实验室,首先应进行生物安全柜等设备的现场检测,确认性能符合要求后方可进行性能检测.
5.加强型医学BSL-2实验室宜采用发烟法对围护结构接缝、设施设备及管道穿越围护结构处、电气面板开关等的密封严密性进行检查,所有缝隙应无可见泄漏.
6.当加强型医学BSL-2实验室有多个运行工况时,除应分别对每个工况进行工程检测,并验证工况转换时系统的安全性,尚应包括系统启停、备用机组切换、备用电源切换以及电气、自控和故障报警系统的可靠性验证.
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一、设计标准
GB/T-16292医药业洁净室(区〉悬浮粒子的测试方法
GB/T-16293医药业洁净室(区〉浮游菌的测试方法
GB 19489-2008实验室生物安全通用要求
GB 50346-2011生物安全实验室建筑技术规范
DB 31/T687-2013临床细胞治疗细胞制备实验室基本要求
二、组织工程技术
根据细胞生物学和程学的原理，将具有特定生物学活性的组织细胞与生物支架材料综合，在体外或体内形成组织或器官，以维持、修复、再生或改善受损组织或器官结构和功能的一项生物技术。
三、临床组织工程
实施临床级组织工程化组织制备的软硬件集成系统该系统采用物联网信息技术实现细胞/支架/材料/组织制备环境参数受控、数据-罔像处理和设备集成等智能化管控功能，满足医疗专业人员从事临床级支架材料处理、人体细胞组织样本采集、细胞分离纯化、培养扩缩、人体组织体外构建、熔养、功能
鉴定与质控等技术的临床应用
四、设计要求
干细胞制备实验室应符合组织工程化组织特定的生产工艺流程和技术特点。
干细胞制备实验室应满足组织工程化组织制备及其临床应用的生物安全性、技术稳定性和质量可控性。
干细胞制备实验室庇满足无菌操作要求应能避免外源致病微生物引人以及供体间的交叉污染。
干细胞制备实验室应满足可迫溯运行管理要求。
五、分区要求
1.干细胞制备实验室用房分为洁净区和非洁净区。
2.洁净区包括支架材料处理室、组织样本处理室、细胞分离室、细胞培养室、组织构建室组织培养室、无菌质量检测与控制室、清洗消毒室、废弃物灭活处理室等；非洁净区包括组织学检测室、分子生物学检测室、储存室、监控中心、资料档案室等。
六、环境要求
1.环境设计应符合GB 19489、GB 50333、GB 50346、GB 50457、DB 31/T687的要求。
2.环境参数〈温度湿皮照皮、新鲜空气盘等〉应符合GB 5059、DB 31/T68的要求。
3.干细胞制备实验室以控制微生物污染为核心，洁净度等级及微生物检测参数要求如下，不得有污染源。
4.B级环境背景、局部A级：包含细胞/组织制备处理过程相关的功能分区，与细胞/材料/组织制备直接相关的操作应在生物安全柜内操作。
5.C级环境背景、局部A级：包含材料/组织预处理以及无菌质量检测与控制相关的功能分区，与细胞/材料/组织处理直接相关的操作应在生物安全柜内操作。
6.C级环境背景：包含洗衣、清洗、消毒功能分区。
7.D级环境背景：包含废弃物灭活处理相关功能分区。
8.洁净区应由具有资质的第三方专业机构定期进行净化指标的检测，检测方法应符合GB/T 16292、GB/T 16293、GB50591的要求。
七、布局要求
干细胞制备实验室总平面布局应符合GB19489、GB50333、GB50346、GB50457的要求应有利于环榄净化、
避免交叉污染等要求。建筑平而和间布局应具有适当的灵活性。主体结构的耐久性应与室内装备、装修水平相协调。清洁物与污物的放置应严格分隔。洁净区内物品传递距离应尽可能短捷，清洁物与污物传递通道戒严格分开。
八、装饰要求
干细胞制备实验室用房装饰要求原则应符合GB 19489、GB 50333、GB 50346、GB 50457的要求。
九、水电气要求
1.空气净化、空调通风系统、送风管道、气流组织和水气供应系统应符合《药品生产质量管理规范》(20年修订版）的相关要求。
2.在干细胞制备实验室人口处成设置自动洗手和洁净风烘干设备。
3.细胞培养所需氧化碳（C02）氮气等供气设备应置于净化室旁的非洁净区。
4.标识系统应符合以下要求
干细胞制备实验室的出人口应设有显示干细胞制备实验室作状态的文字或灯光标识；
干细胞制备实验室内所有房间的出口和逃生路线应有在黑暗中可明确辨认的指示标识，有潜在危险的任何
区域应有明确和醒目的标识；
污物和清洁传递窗应有明确和醒目的标识。
5.强电系统要求
干细胞制备实验室的用电负荷等级和供电姿求应符合GB 50052的工艺要求
干细胞制备实验室的电源线宜采用桥架和预埋线糟布线，电源进线应设置切断装置，并宜设在非洁净区便于操作管理的地点。
6.照明系统要求
照明灯具安装要求应符合DB31/T687艺要求；
平均照度值宜大于等于300Lx，且应满足材料、细胞、组织制备的照度要求。
7.弱电系统应要求
各弱电系统管线布置应有防干扰措施，弱电系统设施及其终端布线应采用桥架和预埋线糟方式并符合相关标准的要求；
各房间均应预留大于等于4个系统集成控制的网络通信端口。
8.消防系统要求
干细胞制备实验室房间均应按GB 50016的主要求安装火灾自动烟感报警装置、设置紧急逃生通道和安全出口(可为全封闭的玻璃门，并备有铁锤)，安全出口大小尺寸应兼顾相应的仪器设备迸出口；
干细胞制备实验室夹层宜安装火灾自动警装置，干细胞制备实验室不应设置自动洒灭火喷头;
应设置消防警示标识，消防应急照明时间应大于等于30min。
十、监控系统要求
1.干细胞制备实验室装备设施配置应符合GB19489、GB 50333、GB 50346、GB50457、GB 50591、DB 31/T687
的要求。
2. 干细胞制备实验室装备设施应包括电子标识系统、环境监测系统、视频监控系统、出入口控制（门禁）系统、入侵报警系统、消防安全系统与中央数据处理可迫溯系统等相关设施设组成。
3.装备设施的设计安装维护应符合灭的、防尘防微生物污染和工艺合理的主要求。
4.干细胞制备实验室应设置通信对话系统和计算机络系统，以实现干细胞制备实验室内部与外部系统交换资料和数据。宜预留通信端口，以实现数字医疗和电子病历对接。
5.干细胞制备实验室中央数据处理追溯系统(监测、监视与监控总控系统）应实时记录干细胞制备实验室内有控制要求的参数、关键设施设备的运行状态；应能监控、记录发生故障的现况、发生时间持续时间应可随时查看历史记录。对干细胞制备实验室样本检测、人员活动应实行实时监测、监视与监控报警。管理软件系统应与总控系统集成。
十一、环境监测系统要求
1.环境监测系统应由远程在线粒子计器及探测器、远程在线温湿度探测器、远程在钱压差探测器、在线监控软件及系统组成；
2.干细胞制备实验室内环境生安全应实行全过程实时监控(包括实时监测、显示、记策和储存干细胞制备实验室各区域的尘埃粒子、相对湿度、温度、压差等参，以及记录生物安全柜、净化工作台、CO2培养箱、超低温冰箱等主要实验设备的运行状态)，各参数应易于区分利识别，并能随时追溯历史记录。
十二、建设基本要求
1.干细胞制备实验室应配备相对独立的质检洁净区、生产洁净区与质检洁净区不能混用。质检洁净区总体平面布置应符合GB 19489、GB 50333、GB 50346、GB 50457、DB31/T 687的要求，应有利于环境净化，避免交叉污染，要流物流严格区分。质控洁净区内的功能区宜包含清洗消毒室，应具有无菌检测室、微生物限度室、培养室、阳性对照室及废弃物灭活处理室。
2.无菌检测室与微生物限度室应设置为相对独立的功能区，不能混用，室内空气洁净度要求为C级以上，所有与生物制品直接接触的处理操作宜A/B型生物安全柜中进行。
3.培养室为相对独立的功能区，空气洁净度要求为C级以上。
4.阳性对照室应为洁净区外相对独立的功能区，应设立独立的回风系统，空气洁净度要求为D级以上，所有与阳性菌直接接触的处理操作宜在A/B型生物安全柜中进行。
5.质控洁净区的基本操作要求与生产洁净区一致，进出洁净区均应经过缓冲并更换无菌操作衣。待检样品需经带向自净功能的传递窗传入无菌检测室或微生物限度室。
6.质控细胞制备实验室宜配备组织学检测室、分子生物学检测室、力学测定室等相关质控功能区，以满足
对组织程化组织结构及功能全面质控检测的要求。
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